Genų pistoleto taikymas vaisių vystyme

Vyšnios yra vaisiai, kurie yra gana priklausomi nuo klimato. Vaisių vystymosi metu jos brandinimą reguliuoja absizinė rūgštis (ABA).

Šiame tyrime buvo panaudotas viruso sukeltas geno slopinimo (VIGS) ir dalelių bombardavimo metodas, skirtas identifikuoti keturias cDNA, koduojančias 8'-hidroksilazę (pagrindinį fermento oksidacinį katabolizmą ABA) saldžiųjų vyšnių vaisiuose. Dezoksiribonukleino rūgštis) Paccyp707a1-a4

Paccyp707a2 neigiamai reguliuoja vyšnių vaisių nokinimą, o paccyp707a1 tarpininkauja sausros tolerancijai

Viruso sukeltas geno slopinimas (VIGS) reiškia virusą, užkrėtantį augalą, turintį tikslinio geno fragmentą, kuris gali sukelti endogeninį geno slopinimą, sukelti fenotipinius pokyčius ir tada tirti tikslinio geno funkciją, pagrįstą fenotipine variacija.

1 paveikslas. ABA biosintezės (pacnced1), ABA katabolizmo (paccyp707as) ir su ABA turiniu susijusių genų pokyčiai saldžių vyšnių vaisių vystymo ir brendimo metu. a) Absoliutus keturių pacyp707 transkripcijos lygis vaisių vystymosi metu. b) santykiniai transkripto lygiai, sukaupti pcnced1 ir aba vystymosi metu. Aktinas buvo naudojamas kaip vidaus kontrolė ir jo ekspresija buvo aptikta qrt-pcr.

PAccyp707a geno ekspresija dehidratacijos reakcijoje

Iš 32 dienų surinktų vaisių buvo suskirstyti į dvi grupes, o po 3 dienų laikymo esant mažam santykiniam drėgnumui (45%) ir dideliam santykiniam drėgnumui (100%), vandens nuostolių lygis buvo 16% esant 45% santykiniam drėgnumui. ABA kiekis ir pNCED1 transkripcijos lygis vaisiuose buvo gerokai didesnis nei kontrolinėje grupėje. Jis kontroliuoja (2 pav.). Priešingai, po dehidratacijos Paccyp707a1 ekspresija buvo žymiai sumažinta, o Paccyp707a3 ekspresija taip pat buvo reguliuojama, nors ir mažesniu mastu, ir Paccyp707a4 ir Paccyp707a2 ekspresija nebuvo paveikta dehidratacijos (2 pav.). Svarbiausias pokytis įvyko paccyp707a1 ekspresijoje, kuri vaisių nokinimo metu gali būti pagrindinis sausrą reaguojantis geno šeimos narys paccyp707a.

Paccyp707A2 geno slopinimas skatina vaisių spalvą ir brandinimą

Vaisių fenotipą apdorojo Paccyp707A1 / 2-RNAi. 28 dieną po žydėjimo 90 vaisių buvo atrinkti iš trijų atskirų vaismedžių soduose apsodintų vyšnių medžių ir suskirstyti į tris grupes po 30 virusų sukeltų genų slopinimo eksperimentų.

Paccyp707a1-rnai, paccyp707a2-rnai ir kontrolinis trv vektorius (be cyp707a geno) buvo įpurškiami atitinkamai į 1, 2 ir 3 grupių vaisių pedicelius.

Vaisiai buvo įvertinti 7 dienas po inokuliacijos.

a) vaisių apdorojimas; d) 28 dienos po žydėjimo;

b) 43d vaisių gydymui;

c) vaisių 43d trv vektorinis gydymas (be cyp707a geno);

d) 43 d pacyp707a1 RNAi apdoroti vaisiai;

e) augalų RNAi apdorojimas;

f) Paccyp707a2 RNAi gydyti vaisiai praėjus 6 dienoms po gydymo (dešinė kontrolė);

g) 6 dienas po vaisiaus apdorojimo paccyp707a1 RNAi (kontroliniai vaisiai dešinėje).